ATP含量检测试剂盒 微量法

ATP 含量检测试剂盒说明书
微量法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷8三楼
英文名称:ATP content detection kit
产品商标：solarbio
注意：正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC0305
规格：100T/96S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：1560
库存状态：现货
关键词：ATP含量检测|ATP含量|ATP|

产品内容：
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入3.5mL 蒸馏水充分溶解，可加热促进溶解；
试剂三：液体4mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前每支加入0.4mL 蒸馏水溶解，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入1mL 蒸馏水；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存。临用前加入0.5mL 蒸馏水备用，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；
标准品：粉剂×1 支，-20℃保存。5mg ATP，临用前加入0.826mL 蒸馏水配成10μmol/mL 的ATP标准溶液。

产品说明：
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ATP 含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。
HK 催化葡萄糖和ATP 合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH 在340nm 有特征吸收峰，NADPH 和ATP 含量成正比，以此反应ATP 含量。

自备仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/ 96 孔UV 板、研钵/匀浆器、蒸馏水和lv仿。

操作步骤：
一、ATP 的提取：
1、血清（浆）中ATP 的提取：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积（mL）为1：5~10 的比例（建议取约0.1mL 血清（浆），加入1mL 提取液），充分震荡，10000g，4℃离心10min；取上清液另一EP 管中，加入500μL 的lv仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

2、组织中ATP 的提取：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心10min，取上清另一EP 管中，加入500μL 的lv仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。
3、细胞或细菌中ATP 的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波破碎1min（冰浴，强度20％或200W，超声2s，停1s），10000g 4 ℃离心10min；取上清液另一EP 管中，加入500μL 的lv仿充分震荡混匀，10000g 4℃离心3min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定）。

二、测定步骤：
1、紫外分光光度计/酶标仪预热30 min 以上，调节波长到340nm，蒸馏水调零。
2、将10μmol/mL 的ATP 标准溶液用蒸馏水稀释16 倍即0.625 μmol/mL 标准溶液备用。
3、工作液的配制：临用前请按试剂二(mL)：试剂三(mL)：试剂四(mL)：试剂五（mL）：试剂六(mL)=1：1：0.1：0.4：0.1 的比例配制，现配现用。
4、加样表
在微量石英比色皿或96 孔UV 板中加入：
试剂名称(μL)          测定管          标准管
样本                   20
标准液                                 20
试剂一                128             128
工作液                 52              52

充分混合后，立即测定340nm 下10s 的吸光值A1，然后将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴中反应3min，拿出擦拭干净立即测定其在3min10s 时的吸光值A2。用96 孔板则放入37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）培养箱中（酶标仪若自带控温功能，则将温度调37℃或25℃）。分别计算ΔA 测定=A2 测定管-A1 测定管，ΔA 标准=A2标准管-A1 标准管

三、ATP 含量计算：
1、血清（浆）中ATP 含量计算
ATP 含量(μmol/mL) =ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×（V 提取+V 血清（浆））÷V 血清（浆）=6.875×ΔA 测定÷ΔA 标准
2、组织、细菌或细胞中ATP 含量计算
（1） 按样本鲜重计算
ATP 含量（μmol/g 鲜重）= ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷W=0.625×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W
（2） 按细菌或细胞密度计算
ATP 含量(μmol/106 cell）=ΔA 测定÷（ΔA 标准÷C 标准）×V 提取÷5=0.125×ΔA 测定÷ΔA 标准

C 标准管：标准液浓度，0.625μmol/mL；
V 提取：加入的提取液体积，1mL；
V 血清（血浆）：血清（浆）体积，0.1mL；
W：样本质量，g；
5：细胞或细菌总数，5×106 个。

注意事项
1、加入提取液离心后的上清若为浑浊为正常现象。
2、提取过程严格在冰浴条件下进行。
3、用微量石英比色皿测量的吸光值大于1.4 或者ΔA 测定大于1.2 时（石英96 孔板的吸光值大于1.4 或者ΔA 测定大于1.2 时），可以将样品稀释后进行测定。若吸光值小于0.01，则可以增加反应时间（5min 或10min）来测定，标准品需要增加同样的反应时间。

相关文献：

《Intracellular citrate accumulation by oxidized ATM-mediated metabolism reprogramming via PFKP and CS enhances hypoxic breast cancer cell invasion and metastasis》 作者:Meixi Peng, Dan Yang, Yixuan Hou, Shuiqing Liu, Maojia Zhao, Yilu Qin, Rui Chen, Yong Teng & Manran Liu 期刊:Cell Death & Disease 影响因子:5.959 PMID:30850587
《RIP3 inhibition protects locomotion function through ameliorating mitochondrial antioxidative capacity after spinal cord injury》 作者:Yang Wang，Jianhang Jiao，Shanyong Zhang，Changjun Zheng，Minfei Wu 期刊:Biomedicine & Pharmacotherapy 影响因子:3.743 PMID:31146112
《Cancer-Associated Fibroblasts Accelerate Malignant Progression of Non-Small Cell Lung Cancer via Connexin 43-Formed Unidirectional Gap Junctional Intercellular Communication》 作者:Luo M,Luo Y, Mao N, Huang G, Teng C,Wang H, Wu J, Liao X, Yang J 期刊:Cellular Physiology and Biochemistry 影响因子: PMID:30453281
《Cell death induced by α-terthienyl via reactive oxygen species-mediated mitochondrial dysfunction and oxidative stress in the midgut of Aedes aegypti larvae》 作者:JieZhangaShakilAhmadaLan-YingWangaQianHanbJian-ChunZhangaYan-PingLuo 期刊:Free Radical Biology and Medicine 影响因子:5.657 PMID:31022448

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